常用的HPLC色譜柱多為硅膠基質(zhì)填料的，又分正相色譜柱和反相色譜柱兩大類(lèi)。

 

1、正相色譜

正相色譜用的固定相通常為硅膠以及其他具有極性官能團，如胺基團(NH2，APS)和氰基團(CN，CPS)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對比固定相低，如正已烷(Hexane)，氯仿(Chloroform)，二氯甲烷(Methylene Chloride)等。

 

2、反向色譜

反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會(huì )在色譜柱上有更強的保留。常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

 

HPLC色譜柱安裝時(shí)需要注意哪些事項？

 

1、首先應確認柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積，進(jìn)樣閥、柱子、檢測器之間的連接管路內徑盡可能使用內徑較小的管線(xiàn)，同時(shí)控制進(jìn)樣器、色譜柱和檢測器之間連接管線(xiàn)的長(cháng)度。安裝色譜柱之前，確認流路系統中的溶劑是否正常。對分析較復雜的樣品建議安裝保護柱。

 

2、為了使色譜柱與儀器系統達最佳的連接效果，應盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來(lái)的接頭長(cháng)期匹配其他類(lèi)型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。

 

3、使用PEEK 材料的通用接頭，只需用手擰緊不需要特定扳手，使用壓力為5000psi;使用溫度不得超過(guò)100℃。